PCR技术检测HIV病毒
艾滋病检测,是指采用实验室方法对人体血液、其他体液、组织器官、血液衍生物等进行艾滋病病毒、艾滋病病毒抗体及相关指标检测,包括监测、检验检疫、自愿咨询检测、临床诊断、血液及血液制品筛查工作中的艾滋病检测。PCR可用来追踪HIV的自然感染史。可在其它血清学和病毒学标志出现前检测病毒序列,这样可判定无症状而且血清阴性患者潜在的HIV的传播性。
PCR技术在HIV检测中的应用
PCR可用来追踪HIV的自然感染史。可在其它血清学和病毒学标志出现前检测病毒序列,这样可判定无症状而且血清阴性患者潜在的HIV的传播性;可用来监测长潜伏期(4~7年)病人,以及在抗病毒治疗期间病毒的水平;也可用于HIV-1血清阳性母亲的婴儿的HIV检测。在婴儿出生后初的6~9个月期间,他们的血液中存在母体的抗体,因此用PCR可判定婴儿是否真正被HIV感染。
1.血清抗体阴性病人的HIV序列的检测
由于在感染HIV后到出现反应之前有一段滞后期,这个血清学阴性的滞后期通常长达6周至6个月,而且无抗体产生期可能更长些。在此期间受感染者往往检测不到抗体,因此,血清阴性的人也可能已感染HIV.PCR法在高危人群中检测到HIV-1比由血清学转阳确诊的时间可以提高6个月。对少数初次共培养呈阴性的人,甚至可在血清转阳之前24~39个月就能确诊为HIV-1感染。对血清学试验结果不能确定者,也可通过PCR作进一步分析和确诊。
2.血清抗体阳性病人HIV序列的检测
从血清阳性的HIV感染者的外周血单核xibao中可检测出前病毒序列。通过共培养分离出病毒的血清阳性的同性恋男人血液制备的DNA,用PCR可100%检出病毒序列;用血清阴性共培养阴性同性恋者的标本,经PCR扩增检出病毒序列者为64%,血清阴性正常人标本PCR检测也为阴性,表明未出现假阳性结果。由于HIV-1组的广泛的异源性,为提高检测的阳性率可采用多种引物(如LTR,gag和env的引物)。利用PCR法从313份已证实为抗体阳性的标本中检测出310份HIV阳性(99%)。
有人从AIDS或ARC病人的外周血单核xibao培养物,精液xibao和精液上清制备DNA。然后用PCR法和逆转录酶测定法分别检测HIV-1。PCR扩增产物与32P标记的探针退火之后用BstNI消化。再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和自显影。结果表明,在逆转录酶阴性的28个xibao系中有9个以及用逆转录酶法不能确定的9个xibao系中有2个为阳性。这说明过去许多xibao培养物认为是阴性者,实际上用更敏感的PCR测定时则为阳性。
3.新生儿HIV序列的检测
目前所使用的抗病毒药毒性大,因而不能用于HIV抗体阳性而未感染的婴幼儿。但当用PCR检测出HIV-DNA序列后,即可进行抗病毒治疗以及加强机能和营养的治疗。在一项研究中,14名血清阳性母亲的新生儿用PCR检测其中6个为阳性;在出生后12~15个月内血清阴性的10个儿童中有5个为PCR阳性。从血清阳性母亲出生1个月的新生儿中,收集的外周血单核xibao经PCR检测,7个为阳性的婴儿,其中5个在检测后10个月得AIDS;而PCR阴性的9个婴儿,在16个月的追踪检查期间身体状况良好。这些研究表明,PCR技术对被HIV感染母亲的新生儿和血清阴性儿童进行早期的直接的HIV-1检测是十分重要的
HIV感染的母亲其婴儿由于母体抗体的存在,用抗体检测法通常为阳性。但实际上只有20%~60%的婴儿受到HIV感染。因此,对这些婴儿进行HIV感染的早期诊断是十分重要的。现已证明30~50%的这些新生儿可在母亲的子宫里,在分娩和引产或通过产后哺乳时从其母体感染HIV.新生儿血清阳性者并不能说明是HIV感染。因为母体HIV抗体可持续大约15个月之久。在一般情况下,婴儿并不表现出HIV感染的任何症状。病毒xibao培养法对婴儿并不是一种实用的方法;HIV特异IgM抗体的检测在母体抗体存在下也是不可能的;在过量血清抗体存在下检出血清中的HIV抗原也是十分困难的。另外,婴幼儿被HIV感染后病情发展较快。早期诊断,对及时采取治疗措施,延缓阻止病情发展很为重要
PCR技术检测HIV-DNA序列对AIDS和ARC的确诊起着重要作用。但也有人认为 对已知HIV抗体、抗原或培养阳性的病人不必再做PCR。合适的PCR检测对象是那些疑有HIV感染但又缺乏确切的血清学依据的人群,如上述的HIV阳性母亲所生的婴儿,阳性患者的性伴侣,静脉吸毒者和可疑的血清反应者。PCR技术还可用来检测血液制品及疫苗中有无HIV。
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